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點擊次數：514 發布時間：2019/4/23
產品名稱:P1099/pCANTAB-5E噬菌體展示質粒(非空載)
產品名稱:pCANTAB-5E噬菌體展示質粒(非空載)
供應商：上海遠慕
質粒大小:5216bp
質粒標簽:N-g3 signal，C-E tag
原核抗性:氨芐青霉素Amp
克隆菌株:大腸桿菌TG1
培養條件:37℃，有氧，LB
產品特點：是染色質外的雙鏈共價閉合環形DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋結構，不同質粒大小在2-300kb之間，<15kb的小質粒比較容易分離純化，>15kb的大質粒則不易提取。
產品簡介:
本系統是用于抗體基因表達，制備重組抗體。宿主菌 TG1 為質粒載體pCANTAB5e 復制和表達的宿主菌，無抗性，用 2×YT 培養基，37℃進行培養。載體 pCANTAB5e 為用于構建重組單鏈抗體 scFv 的載體，具有氨芐抗性，大小為4522bp，具體圖譜及酶切位點如下示。輔助噬菌體 M13K07 用于拯救噬菌粒，具有卡那抗性，在其輔助下噬菌粒得以復制，并以融合的形式表達在噬菌體表面。在 scFv 基因后面含有一段編碼 Tag 尾肽（E-Tag）的序列，在尾肽后面有一琥珀（Amber）終止密碼子，位于 scFv 基因與 cpIII 基因之間，在抑制型細菌 TG1 中，這種琥珀密碼子只有 20％有效，故在蛋白翻譯過程中可以通讀而形成 scFv-cpIII融合蛋白；但在非抑制型菌株中，如 HB2151，此終止子被識別，同時 scFv 基因在翻譯過程中在 cpIII 基因前終止，形成獨立的抗體蛋白，滯留于細胞膜間隙，并在長時間培養后泄漏在培養液中，形成可溶性表達。
【操作方法】本方法來源于網絡，本平臺未做實驗證實，僅供參考。
1. 輔助噬菌體毒種制備
1) 將輔助噬菌體 M13K07 劃線于 2×YT 瓊脂平板上；
2) 制備 2×YT 半固體瓊脂（0.7％瓊脂）為上層瓊脂（Top Agar），冷卻至 50 ℃時，取 4 mL Top Agar 并加入 0.5 mL 過夜培養的新鮮 TG1 菌（OD660 達 0.8），充分混勻，沿著劃線濃度從低至高的方向，傾注 Top Agar；
3) 37℃培養 6-12 小時，用接種針挑取單個噬菌斑，接種于 30-200 mL 2×YT-K（kanamycin 70 μg/mL），37℃充分振蕩培養 10-14 小時；
4) 8000 rpm 離心 15 min，4 ℃；
5) 小心取上清，建議用 0.45μm 濾膜過濾后，分裝無菌小管，存放 4℃至少可用半年。
2．噬菌體毒種的滴定
1) 準備不含任何抗生素的 2×YT 培養平板 5-6 個；
2) 用 2×YT 培養基配制 0.7%瓊脂平板，即為表層瓊脂（Top Agar），冷卻至 42℃并在 42℃恒溫保存；
3) 將上述噬菌體溶液用培養基做 10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 稀釋；
4) 取過夜培養的 TG1 菌液（OD660=1 左右），分裝小試管，500μL /小試管，標明10-6 至 10-10 稀釋度；
備注：宿主菌的制備請參照 TG1 菌株說明書進行。
5) 加入以上步驟 3 中依次稀釋的噬菌體 100μL 到每個相應的標準稀釋度的試管中，充分混勻，37℃輕柔振蕩反應 30 min；
6) 加入 Top Agar 3 mL 至每個試管中，立即澆注事先準備好的平皿，37℃培養過夜；
7) 計算平皿上的空斑數，乘于相應稀釋倍數，一般濃度可達 1012pfu/mL。
【注意事項】
1．噬菌體毒種，在使用前應按以上推薦的方法進行濃度滴定；
2．噬菌體毒種存放在 4℃下即可，不可-20℃或更低溫度凍存；
P1099/pCANTAB-5E噬菌體展示質粒(非空載) 質粒分類:
1.根據質粒能否通過細菌的接合作用，可分為接合性質粒和非接合性質粒。接合性質粒帶有與接合傳遞有關的基因。非接合質粒在一定條件下通過與其共存的接合質粒的誘動或轉導而傳遞。
2.根據質粒的不相容性，可分為不相容性和相容性。不相容性指結構相似、密切相關的質粒不能穩定地共存于同一宿主細菌內的現象，反之為相容性。常用于流行病學的調查。
3.根據質粒在細菌內的復制類型可分為兩類：嚴緊控制型和松弛控制型。嚴緊控制復制型質粒的復制酶系與染色體DNA復制共用，只能在細胞周期的一定階段進行復制，當細胞染色體停止復制時，質粒也就不再復制。松弛控制復制型的質粒的復制酶系不受染色體DNA復制酶系的影響，在整個細胞生長周期中隨時都可以復制，在染色體復制已經停止時質粒仍能繼續復制。
質粒（plasmid）是細菌或細胞染色質以外的，能自主復制的，與細菌或細胞共生的遺傳成，質粒載體是在天然質粒的基礎上為適應實驗室操作而進行人工構建的質粒。與天然質粒相比，質粒載體通常帶有一個或一個以上的選擇性標記基因（如抗生素抗性基因）和一個人工合成的含有多個限制性內切酶識別位點的多克隆位點序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量盡可能減少，以便于基因工程操作。
產品特色優勢：
1. 國內對照品行業領導者，長達14年對照品的專業研發及標準制定
2. 高效穩定的純化技術-高速逆流色譜技術的運用
3. 特有的高速逆流色譜對照品研發中心及生產中心，保證對照品的質量可控性及批量生產的穩定性
4. 嚴格的質量控制，通過全面的檢測（1HNMR 13CNMR MS HPLC）
5. 部分對照品已獲得國家質量監督檢驗檢疫總局頒發的標準物質證書
6. 完善的庫存及供應體系，所有產品均能現貨供應
7. 高效的銷售團隊，99%的咨詢可即時回復
1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日價格為準。
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
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原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
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