詳細內容

一、貨號：CR2640（50mL純化量）

二、試劑原理：

本試劑盒利用不同蛋白需要的沉淀試劑和沉淀條件不同，通過大量實驗分析驗證而得到的一個與傳統沉淀純化完全不同的精細的具有高活性、高產率、快速以及良好重復性的單克隆抗體的純化方法。

三、試劑特點：

本試劑盒特點在于純化操作的簡單化、所得抗體的高活性和高純度。實驗表明，本試劑盒可以得到90%左右純度的抗體；并且由于配方考究，抗體在純化過程中幾乎沒有損傷，完全保持應有的活性，實際應用好。

四、適用范圍：

本試劑盒適用于小鼠IgG3亞類的單克隆抗體腹水的純化，不能用于IgM和IgA類和其它IgG亞類的單克隆抗體腹水的純化實驗。

五、試劑組成：

六、純化步驟：

1、將單克隆抗體腹水從冰箱中取出，室溫避光放置15分鐘，然后用涼水邊沖邊搖勻快速解凍。

2、將化開的單克隆抗體腹水12000RPM 室溫離心10-20分鐘。

3、先吸棄上面浮沫和油脂，然后將上清轉出到另一個干凈容器或離心管；按每1毫升單克隆抗體腹水加入純化液A 1毫升，室溫避光倒轉20分。

4、8000-12000RPM 室溫離心10-20分鐘，沉淀用純化液B溶解到原單克隆抗體腹水1/2體積；再按每毫升加入純化液C 1毫升，室溫避光倒轉10分鐘。

5、8000-12000RPM 室溫離心10-20分鐘，棄沉淀收集上清；每1毫升上清液加純化液D  1毫升，室溫避光倒轉20分鐘。

6、8000-12000RPM 室溫離心10-20分鐘，收集沉淀用純化液B收集溶解沉淀到原單克隆抗體腹水體積的1/2。

7、透析袋用PBST浸泡3-5分鐘，然后用手揉捏數次，自來水沖凈后接純水沖洗干凈，將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊。

8、透析試劑用純水溶解配成透析液，將要透析的抗體袋子放入。抗體體積：透析液體積=1:50，4℃攪拌透析每次0.5-1小時，共3-4次。

9、8000-12000RPM 室溫離心10-20分鐘，收集上清測蛋白濃度后加10/萬NaN3防腐并除菌過濾加50%甘油冷凍在-20℃存放保存。

七、 注意事項：

1、本試劑對未溶血的小鼠多抗血清的純化也有比較好的效果，但不建議您這樣做，因為溶血的抗血清純化效果欠佳。

2、離心溫度不能超過37℃。

3、操作和量取試劑要細致精準。

4、溶血嚴重和腐敗的腹水不得用于純化。

原創作者：上海遠慕生物科技有限公司

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