一. 實驗目的
1、掌握瓊脂糖凝膠電泳的原理;
2、學習瓊脂糖凝膠電泳的操作。
二. 實驗原理
瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，沸水中溶解，45℃開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。
DNA分子在堿性環境中帶負電荷，在外加電場作用下向正泳動。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分子篩效應。不同DNA，其分子量大小及構型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應，遷移速度與分子量的對數值成反比關系。
溴化乙錠（EB）未扁平狀分子，在紫外照射下發射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復合物，其發射的熒光強度較游離狀態EB發射的熒光強度大10倍以上，且熒光強度與DNA含量成正比。
三、儀器和試劑
儀器： 微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐
試劑： 瓊脂糖：1.0%；電泳緩沖液（50 × TAE 電泳緩沖液取Tris24.2g ，冰/醋酸5.7ml ， 0.25mol/L EDTA (pH8.0)20ml ，加蒸餾水至100ml ） EB：5 ?l / 100 ml TBE
電泳材料：標準分子量核酸（DL2000）
四. 操作步驟
（1）制膠（以20 mL為例）
a. 稱取0.2 g 瓊脂糖，加入20 ml 的1XTAE緩沖液（pH 8.0），搖勻；
b. 微波爐加熱，至瓊脂糖完全溶解（要防止過熱溢出三角瓶）；
c.將制膠板放入制膠槽中，插入適當的梳子，將溶解的瓊脂糖（約50℃）加入2ul EB后，混均勻，倒入其中，直至厚度為4～6 mm（如有氣泡要把氣泡趕出），在室溫下冷卻凝固(約30~ 45 min)；
d.小心垂直向上拔出梳子,以保證點樣孔完好,將膠板置于電泳槽中。
（2）點樣
用微量移液器將5 ?l含藍色染液的 DL2000 加入點樣孔下部。
（3）電泳
打開電源開關，調節電壓至3~5 V/cm(約100 V)，可見到溴酚藍條帶由負向正移動，約30-40分鐘后即可觀察結果。
（4）觀察
將電泳好的膠置于紫外透射檢測儀上，打開紫外燈，可見到橙紅色核酸條帶，根據條帶粗細，可粗略估計該樣品DNA的濃度。如同時有已知分子量的標準DNA進行電泳，則可通過線性DNA條帶的相對位置初步估計樣品的分子量。
五、實驗結果
點樣時效果較好的照片點出的白色熒光線比較亮，條帶粗細均勻；條帶沒有出現兩端粗中間細的情況
客服一
