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遠慕技術:質粒純度不高怎么辦?
閱讀次數:492 發布時間:2022/3/21 11:41:03
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1.混有蛋白:不要使用過多菌體。經溶液P1、P2、P3處理,離心后溶液應為澄清的,如果還混有微小蛋白懸浮物可再次離心去除后再進行下一步驟。

2. 混有RNA:RNaseA處理不徹底,請減少菌體用量或加入溶液P3之后室溫放置一段時間。如果溶液P1已保存6個月以上,請在溶液P1中添加RNaseA。

3. 混有基因組DNA:加入溶液P2和P3后應溫和混勻,如果劇烈振蕩,可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質粒中。如果加入溶液P2后過于粘稠,無法溫和混勻,請減少菌體用量。細菌培養時間過長會導致細胞和DNA的降解,培養時間不要超過16小時。

4. P3溶液加入時間過長:P3溶液加入后,放置時間不要太長,否則有可能會產生小片段DNA污染。

5. 含大量核酸酶的宿主菌:宿主菌含大量核酸酶,在質粒提取過程中降解質粒DNA,影響提取質粒DNA的完整性,好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌,如DH5α和Top10。

6. 質粒的二聚體和多聚體形式:質粒復制過程中形成的,與宿主菌相關,電泳可檢測出多條條帶,單酶切處理后可變成單一條帶。

處理提示:

1、購買后,請務必確認標簽上的注意事項。

2、做好預防顛倒,摔壞的措施和管理體制。

3、在使用再次確認標簽上的注意事項。做好必要的安全對策。

4、對沒有標明其危險特性,有害特性的,也要慎重地進行操作。

5、必須戴好防護用具,小心翼翼進行操作。

6、請參照相關法規,文獻,MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進行安全操作。

7、通常購買試劑時要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,要更加注意其保管和管理。

8、萬一試劑操作者并非業技術人員。必須在業人士的指導監督下進行操作。

9、對于使用后的廢棄物,不要或舊的試劑,應按照相關法律法規正當處理。

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