對于已耗費很多時間、大量擴增起來的細胞,或經過基因轉染、體外刺激等大量工作處理過的細胞,如果發現細胞被支原體污染了,怎么辦?遠慕生物為您分析如何有效把支原體污染趕出你的細胞!
由于期工作量巨大,我們無法丟棄已有細胞。但由于價格原因,又無法使用那些昂貴試劑殺除細胞上的支原體,同時,實驗人員還需要清除細胞上的支原體污染,讓實驗得以往下推進,以終獲得準確的實驗數據。
實驗者可選用對支原體特效的抑制劑,通過對細胞的期處理,中期加藥,逐步通過4代左右的培養,從而將支原體污染徹底清除,確保試驗順利推進,結果準確。
支原體污染對細胞培養造成多方面的不良影響,已經成為在細胞培養時的個嚴重問題,保守估計常規細胞培養中支原體污染率為15-35%,嚴重干擾實驗結果的可信度。因此,定期進行支原體檢測和去除,確保無支原體存在細胞培養體系內才能獲得準確有效的實驗數據。
什么是支原體(Mycoplasma)
支原體又稱霉形體,直徑在0.1-0.3μm,是目發現的小的簡單的原核生物,可以輕松地通過濾膜,混入培養系統中,呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態。通常依附在細胞膜表面,支原體沒有剛性的細胞壁,因此普通的抗生素對它根本不起作用,實驗室常見的種類有:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等。
支原體污染的后果
細菌和真菌造成的污染相對比較容易檢測、預防和去除,然而支原體造成的污染很難察覺,即使生長密度高達 107-109CFU/ml,也很難有污染跡象(渾濁、pH 變化等)。支原體污染后導致細胞生長變慢,狀態變差,不會馬上使細胞致死,但會影響細胞內的各種參數,如改變細胞膜抗原性,改變細胞新陳代謝,干擾核酸的合成,改變 DNA 轉染效率,導致染色體畸變等。
典型的支原體污染來源
①細胞之間交叉污染; ④培養基或其他試劑污染;
②工作環境或實驗器材的污染; ⑤制備細胞的原始組織或器官的污染;
③實驗者無菌操作不佳;
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