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技術文獻

遠慕生物:血紅蛋白測定哪些方法?
閱讀次數:388 發布時間:2020/7/10 17:12:13
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1.氰化高鐵血紅蛋白HiCN測定法:除SHb外
推薦參考方法,具有操作簡單、顯色快、結果穩定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優點。致命的弱點是氰-化鉀(KCN)試劑有劇毒,使用管理不當可造成公害。
氰化高鐵血紅蛋白測定法操作

(1)直接測定法
①加轉化液:試管內加5ml HiCN轉化液
②采血與轉化:取全血20μl,加到盛有轉化液的試管底部,用上清液反復沖洗吸管3次,充分混合,靜置5min。
③測定:以符合WH0標準的分光光度計,波長540nm處,光徑(比色杯內徑)1.000cm,HiCN轉化液或蒸餾水調零,測定吸光度(A)。
④計算:根據樣本的吸光度(A)直接計算出血紅蛋白濃度(g/L)
(A為測定管吸光度,44為毫摩爾消光系數,64458/1000為1mol/L Hb溶液中所含Hb克數,251為稀釋倍數。)


(2)HiCN標準液比色法測定
HiCN參考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),分別測得540nm處的吸光度,以參考液血紅蛋白含量為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線或求出K值。
①標準曲線繪制和K值計算
②樣本吸光度
③通過標準曲線查出樣本血紅蛋白濃度,或用K值計算,血紅蛋白濃度Hb(g/L)=K×A。
 



注意事項
(1)HiCN貯存:轉化液貯存在棕色有塞玻璃瓶中,不能貯存在塑料瓶中,否則會使CN-丟失,測定結果偏低。HiCN轉化液在4℃保存一般可數月,不能在0℃以下保存,因為結冰可使高鐵氰-化鉀還原,試劑失效。
(2)標本:異常血漿蛋白質、高脂血癥、白細胞數超過30×109/L、脂滴等可產生濁度,干擾Hb測定。
(3)HiCN轉化液是一種低離子強度、pH近中性的溶液(7.2±0.2)。樣本中白細胞過高或球蛋白異常增高時,HiCN比色液會出現渾濁。
(4)氰-化鉀試劑是劇,測定后的廢液應收集于廣口容器中,首先以水稀釋廢液(1:1),再按每升上述稀釋液加次氯酸鈉35ml,充分混勻,敞開容器,放置15h以上,使CN-氧化成C02和N2揮發,或水解成C032-和NH4+,再排入下水道。廢液不能直接與酸性溶液混合,因為氰化-鉀遇酸可產生劇毒的氰氫酸氣體。


2.十二烷基-硫酸鈉血紅蛋白SDS測定法:
具有操作簡單、呈色穩定、準確性和精確性符合要求、無公害等優點。但由于摩爾消光系數尚未*后確認,不能直接用吸光度計算Hb濃度,而且SDS試劑本身質量差異較大,會影響檢測結果。


3.HiN3吸收峰542nm,顯色快,結果穩定。

原創作者:上海遠慕生物科技有限公司

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