由于制備單克隆
抗體的實驗周期長，環節多，所以影響因素就比較多，稍不注意就會造成失敗。
其主要失敗原因和影響因素有：
1、污染包括細菌、霉菌和支原體的污染。這是單克隆抗體制備工作中zui辣手的問題。一旦發現有霉菌污染就應及早將污染板棄之，以免污染整個培養環境。支原體的污染主要來源于
牛血清，此外，其它添加劑、實驗室工作人員及環境也可能造成支原體污染。在有條件的實驗室，要對每一批小牛血清和長期傳代培養的
細胞系進行支原體的檢查，查出污染源應及時采取措施處理。對于污染的雜交瘤細胞可以采取生物學的過濾方法，將污染的雜交瘤細胞注射于BALB／c小鼠的腹腔，待長出腹水或實體瘤時，取出分離雜交瘤細胞，一般可除去支原體污染。
2、融合后雜交瘤不生長在保證融合技術沒有問題的前提下主要考慮下列因素：
(1)牛血清的質量太差，用前沒有進行嚴格篩選；
(2)HAT有問題，主要是A含量過高或HT含量不足；
(3)骨髓瘤細胞污染了支原體；
(4)EG有毒性或作用時間過長。
3、雜交瘤細胞不分泌抗體或停止分泌抗體融合后有細胞生長，但無抗體產生，可能是HAT中A失效或骨髓瘤細胞發生突變，變成A抵抗細胞所致。有可能是免疫原抗原性弱，免疫效果不好。對于原分泌抗體的雜交瘤細胞變為陰性，可能是細胞支原體污染，或非抗體分泌細胞克隆競爭性生長，從而抑制了抗體分泌細胞的生長。也可能發生染色體丟失。之前提出的“三要”“三不要”，可能是防止抗體停止分泌的有效措施。
三要：
要大量保持和補充液氮凍存的細胞原管。
要應用倒置顯微鏡經常檢查細胞的生長狀況。
要定期進行再克隆。
三不要：
不要讓細胞“過度生長”。因為非分泌的雜交瘤細胞將成為優勢，壓倒分泌抗體的雜交瘤細胞。
不要讓培養物不加檢查地任其連續培養幾周或幾個月。
不要不經克隆化而使雜交瘤在機體內以腫瘤生長形式連續傳好幾代。
4、雜交瘤細胞難以克隆化可能與小牛血清質量、雜交瘤細胞的活性狀態有關，或由于細胞有支原體污染，使克隆化難以成功。若是融合后的早期克隆化，應在培養液加HT。
原創作者：上海遠慕生物科技有限公司
客服一
