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養(yǎng)了很久的細胞，有一些經(jīng)驗和體會總結(jié)一下，和大家分享一下。關(guān)于如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)很好更漂亮。

1.不同的細胞，喜歡的環(huán)境是不一樣的。
這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細胞生長的空間密度問題。
有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長，生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好，譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞，生長速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時就應該留很少量的細胞，這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長，而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候，細胞形態(tài)基本上就會差了，老化的會比較多，對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。
 

2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞，如果細胞形態(tài)不好，（或者細胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時候進行如下操作：
首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進行預吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細胞我們只吹打，不消化的）
其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。
如果一次效果還不理想，可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。

3.關(guān)于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。
這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。（可能也是競爭很大，有優(yōu)勝劣汰吧。）對于生長速度快的細胞，易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。

4.關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問題。
個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性塑料瓶相對好一些。而對于同一種細胞，在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比塑料瓶內(nèi)好。這可能是因為塑料瓶比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在塑料瓶這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。
所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài)，塑料瓶比玻璃瓶會好，對于生長速度慢的細胞，玻璃瓶則會更好。同樣，對于同一種細胞，在其生長速度慢的時候，塑料瓶會好一點，比如剛剛復蘇的時候，或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。

5.傳代時消化的問題。
可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好*至關(guān)重要的考驗。
很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。
在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊……

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司